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对乳制品中进行内酰胺酶检测的方法分享
发布时间:2022-06-21   点击次数:130次
  乳中抗生素的来源主要有两种途径,一是采用β-内酰胺类抗生素治疗牛乳腺炎造成牛乳中抗生素残留,二是奶牛长期喂饲含抗生素的饲料,很容易造成乳中抗生素残留川。饮用含有抗生素的牛奶可能导致饮用者对抗生素的过敏反应,或因长期接触抗生素而导致耐药。泌乳奶牛经过药品合理间隔期后挤奶,可以减少抗生素在奶中残留,实现无抗奶。因此,世界各国都严格限定原料乳抗生素最大残留*'2。β-内酰胺酶是由对β-内酰胺类抗生素耐药菌株分泌的一种胞外酶。该酶可选择性分解β-内酰胺类抗生素,能够使青霉素内酰胺结构破坏而失去活性。由于利益驱动使得不法分子利用β-内酰胺酶降解乳中所含抗生素。该酶的使用掩盖了牛奶中实际含有的抗生素,导致青霉素、头孢菌素等抗生素类药物耐药性增高,从而大大降低了人们抵抗传染病的能力。
 
  对乳制品中进行内酰胺酶检测的方法:
 
  1.范围
 
  本标准规定了乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物的检验方法。
 
  本标准适用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类物质的检验。
 
  本方法的检出限为4U/mL。
 
  2.原理
 
  该方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株,利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,并加入青霉素作为对照,通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。
 
  3.操作步骤
 
  3.1 菌悬液的制备
 
  将藤黄微球菌接种于营养琼脂斜面上,经36士1℃培养18h-24 h,用生理盐水洗下菌苔即为菌悬液,测定菌悬液浓度,终浓度应大于1×1010 CFU/mL,4 ℃保存,贮存期限2周。
 
  3.2 样品的制备
 
  将待检样品充分混匀,取1 mL待检样品于1.5 mL离心管中共4管,分别标为:A、B、C、D,每个样品做三个平行,共12 管,同时每次检验应取纯水1 mL加入到1.5 mL离心管中作为对照。如样品为乳粉,则将乳粉按1:10的比例稀释。如样品为酸性乳制品,应调节pH值至6-7。
 
  3.3 检验用平板的制备
 
  取90mm灭菌玻璃培养皿,底层加10 mL灭菌的抗生素检测用培养基Ⅱ,凝固后上层加入5 mL含有浓度为1×108 CFU/mL藤黄微球菌的抗生素检测用培养基Ⅱ,凝固后备用。
 
  3.4 样品的测定
 
  按照下列顺序分别将青霉素标准溶液、β-内酰胺酶标准溶液、舒巴坦标准溶液加入到样品及纯水中:
 
  A 青霉素5 μL。
 
  B 舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。
 
  C β-内酰胺酶25 μL、青霉素G5 μL。
 
  D β-内酰胺酶25 μL、舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。
 
  混匀后,将上述A~D 试样各200 μL 加入放置于检验用平板上的4个无菌牛津杯中,36士1℃培养培养18~22 h ,测量抑菌圈直径。每个样品,取三次平行试验平均值。
 
  3.5 结果报告
 
  纯水样品结果应为:(A)、(B)、(D)均应产生抑菌圈;(A)的抑菌圈与(B)的抑菌圈相比,差异在3 mm以内(含3 mm),且重复性良好;(C)的抑菌圈小于(D)的抑菌圈,差异在3 mm以上(含3 mm),且重复性良好。如为此结果,则系统成立,可对样品结果进行如下判定:
 
  6.1 如果样品结果中(B)和、(D)均产生抑菌圈,且(C)与(D)抑菌圈差异在3 mm以上(含3 mm)时,可按7.1.1、7.1.2 判定结果。
 
  6.1.1(A)的抑菌圈小于(B)的抑菌圈差异在3 mm以上(含3 mm),且重复性良好,应判定该试样添加有β- 内酰胺酶,报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阳性。
 
  6.1.2(A)的抑菌圈同(B)的抑菌圈差异小于3 mm,且重复性良好,应判定该试样未添加有β- 内酰胺酶,报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阴性。
 
  6.2 如果(A)和(B)均不产生抑菌圈,应将样品稀释后再进行检测。

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