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平板菌落计数法的具体操作步骤分析
发布时间:2018-05-25   点击次数:884次
    全自动菌落计数仪是由计数池、计数笔、计数器及数码显示器等组成。本仪器操作方便、计数准确,可减轻实验人员的劳动强度,提高工效,提高工作质量。该仪器广泛用于食品、饮料、药品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。平板菌落计数法的具体操作步骤分析如下:
    1、编号 
    取无菌平皿9套,分别标明为10-4、10-5、10-6各三套,另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 
    2、稀释 
    用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液,地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释,将多余的菌液放回原菌液中。 
将10-1试管充分振荡、混匀。另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回吹吸菌液三次,进一步将菌体分散、混匀。动作不要太猛太快,吸时插入,吹时提出,再用此吸管吸取10-1菌液1mL,地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释,依次类推。 
    3、取样
    用三支1ml无菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL。
    4、倒平板 
   尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至45度的LB培养基约15-20ml,置水平位置迅速旋动平皿,使培养基与菌液混合均匀。
    5、培养 
   倒置于37度培养箱中培养48小时。
   6、计数 
   算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算; 每毫升中菌落形成单位(cfu)= 同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5 

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